Conjunto de Cebadores, Sondas, Procedimiento y Kit para el Genotipado del Polimorfismo Genético S447X del Gen LPL

26 de octubre de 2010

El enzima LPL (lipasa lipoprotéica) juega un papel clave en el metabolismo lipídico ya que hidroliza el grueso de triglicéridos presentes en el corazón de quilomicrones y lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) que circulan en plasma. Diferentes estudios han demostrado la implicación del gen en cuestión en el desarrollo de la arteriosclerosis y la aparición de distintas dislipemias de base genética. De las variantes descritas en el gen, el polimorfismo S447X se ha asociado a menores niveles de triglicéridos y mayores concentraciones de colesterol HDL y por tanto a un efecto protector frente a arteriosclerosis y síndrome metabólico. No obstante, los métodos de genotipado conocidos presentan una serie de inconvenientes que son parcial o completamente solventados por la presente invención, referida a un conjunto de cebadores, sondas, procedimiento y kit para el genotipado del polimorfismo genético S447X del gen LPL. El fundamento básico de la presente invención consiste en una única reacción de PCR en la que se aprovecha la actividad 5' exonucleasa del enzima Taq polimerasa. En la reacción de PCR están presentes cuatro oligonucleótidos: dos cebadores específicos que flaquean el polimorfismo de interés y dos sondas lineales fluorogénicas, específicas de cada alelo. Estas sondas están marcadas en el extremo 5' con un fluorocromo de referencia, distinto para cada sonda, y una molécula extintora en el 3'. Cuando las sondas están intactas, la señal emitida por la excitación del fluorocromo de referencia es captada por la molécula extintora, debido a la proximidad física entre ambas, y por tanto no se detecta. La señal fluorescente, diferente para cada alelo, sí se detecta cuando la sonda hibrida con el alelo totalmente complementario y se libera el fluorocromo de referencia, por la actividad 5'→3' exonucleasa de la polimerasa, durante los ciclos de la reacción de PCR. APLICACIONES Los polimorfismos genéticos de un solo nucleótido (en inglés single nucleotide polimorphisms o SNPs) son la forma más frecuente de variación que se puede encontrar en el genoma humano. El estudio de la variabilidad genética tiene repercusión biosanitaria puesto que el papel que se atribuye a los SNPs es, junto con distintos factores ambientales, de moduladores de la susceptibilidad individual a padecer la mayoría de las enfermedades comunes (hipertensión, diabetes, obesidad, arteriosclerosis...). De este modo, el desarrollo de las técnicas de genotipado es un tema en auge actualmente y es el campo en el que se encuadra la invención. VENTAJA COMPETITIVA Las principales ventajas de la presente invención son: Gran rapidez que permite el genotipado a gran escala ya que la reacción de PCR y la detección de la señal fluorescente son simultáneas. Asignación de genotipos automatizada y obtenible de forma inmediata al finalizar la reacción. Gran sensibilidad que permite genotipar muestras empleando concentraciones muy bajas de ADN. Menor riesgo de contaminación al tratarse de un ensayo homogéneo.

Composición y Método Cinético de Medición de la Actividad Lipasa.

30 de noviembre de 2011

Se presenta una nueva fórmula y procedimiento para medir la actividad lipasa e nivel de lector de microplaca, mediante una reacción colorida que permite cuantificar la concentración de lipasa de una forma sencilla, práctica y rápida. Ventaja competitiva No existe en el mercado un método colorimétrico que permita determinar a nivel de microplaca la actividad lipasa. Está nueva fórmula y procedimiento permite determinar la actividad lipasa en múltiples muestras al mismo tiempo, lo que le da versatilidad y eficiencia. Se propone generar un kit de determinación de lipasa que contenga los reactivos y el procedimiento para la determinación, incluyendo una curva patrón o estándar. El kit permite medir la actividad lipasa de diferentes extractos de plantas, animales y microorganismos. Sectores de aplicación El kit tiene aplicación en instituciones de educación superior que tengan laboratorios con capacidad para realizar análisis enzimáticos en animales, plantas y microorganismos; laboratorios de investigación de universidades y centros públicos y privados relacionados con temas de fisiología, nutrición y biotecnología. La industria que produce o comercializa insumos de laboratorio tiene una ventana de oportunidad para incorporar este novedoso kit de lipasa dentro de sus productos para los laboratorios que realizan análisis y estudios sobre enzimas.

Red Otri de Andalucía. Tag: Kit.

Conjunto de Cebadores, Sondas, Procedimiento y Kit para el Genotipado del Polimorfismo Genético S447X del Gen LPL

Composición y Método Cinético de Medición de la Actividad Lipasa.