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Conjunto de Cebadores, Sondas, Procedimiento y Kit para el Genotipado del Polimorfismo Genético -1131T/C del Gen APO A5

26 de octubre de 2010

La apolipoproteína A5 es uno de los componentes proteicos de los quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y de alta densidad (HDL). Diferentes estudios han demostrado que es un potente modulador de los niveles plasmáticos de triglicéridos, considerados un factor independiente de riesgo vascular. Desde el descubrimiento del gen en el año 2000 se han descrito numerosas mutaciones y polimorfismos, algunos de ellos asociados a dislipemia y también a mayor riesgo de sufrir enfermedades vasculares. Este es el caso del polimorfismo -1131T/C. No obstante, los métodos de genotipado conocidos presentan una serie de inconvenientes que son parcial o completamente solventados por la presente invención, referida a un conjunto de cebadores, sondas, procedimiento y kit para el genotipado de polimorfismos genéticos, más concretamente para el genotipado del polimorfismo genético -1131T/C del gen APO A5. El fundamento básico de la presente invención consiste en una única reacción de PCR en la que se aprovecha la actividad 5' exonucleasa del enzima Taq polimerasa. En la reacción de PCR están presentes cuatro oligonucleótidos: dos cebadores específicos que flaquean el polimorfismo de interés y dos sondas lineales fluorogénicas, específicas de cada alelo. Estas sondas están marcadas en el extremo 5' con un fluorocromo de referencia, distinto para cada sonda, y una molécula extintora en el 3'. Cuando las sondas están intactas, la señal emitida por la excitación del fluorocromo de referencia es captada por la molécula extintora, debido a la proximidad física entre ambas, y por tanto no se detecta. La señal fluorescente, diferente para cada alelo, sí se detecta cuando la sonda hibrida con el alelo totalmente complementario y se libera el fluorocromo de referencia, por la actividad 5'→3' exonucleasa de la polimerasa, durante los ciclos de la reacción de PCR. APLICACIONES Los polimorfismos genéticos de un solo nucleótido (en inglés single nucleotide polimorphisms o SNPs) son la forma más frecuente de variación que se puede encontrar en el genoma humano. El estudio de la variabilidad genética tiene repercusión biosanitaria puesto que el papel que se atribuye a los SNPs es, junto con distintos factores ambientales, de moduladores de la susceptibilidad individual a padecer la mayoría de las enfermedades comunes (hipertensión, diabetes, obesidad, arteriosclerosis...). De este modo, el desarrollo de las técnicas de genotipado es un tema en auge actualmente y es el campo en el que se encuadra la invención. VENTAJA COMPETITIVA Las principales ventajas de la presente invención son: Gran rapidez que permite el genotipado a gran escala ya que la reacción de PCR y la detección de la señal fluorescente son simultáneas. Asignación de genotipos automatizada y obtenible de forma inmediata al finalizar la reacción. Gran sensibilidad que permite genotipar muestras empleando concentraciones muy bajas de ADN. Menor riesgo de contaminación al tratarse de un ensayo homogéneo.

Conjunto de Cebadores, Sondas, Procedimiento y Kit para el Genotipado del Polimorfismo Genético S447X del Gen LPL

26 de octubre de 2010

El enzima LPL (lipasa lipoprotéica) juega un papel clave en el metabolismo lipídico ya que hidroliza el grueso de triglicéridos presentes en el corazón de quilomicrones y lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) que circulan en plasma. Diferentes estudios han demostrado la implicación del gen en cuestión en el desarrollo de la arteriosclerosis y la aparición de distintas dislipemias de base genética. De las variantes descritas en el gen, el polimorfismo S447X se ha asociado a menores niveles de triglicéridos y mayores concentraciones de colesterol HDL y por tanto a un efecto protector frente a arteriosclerosis y síndrome metabólico. No obstante, los métodos de genotipado conocidos presentan una serie de inconvenientes que son parcial o completamente solventados por la presente invención, referida a un conjunto de cebadores, sondas, procedimiento y kit para el genotipado del polimorfismo genético S447X del gen LPL. El fundamento básico de la presente invención consiste en una única reacción de PCR en la que se aprovecha la actividad 5' exonucleasa del enzima Taq polimerasa. En la reacción de PCR están presentes cuatro oligonucleótidos: dos cebadores específicos que flaquean el polimorfismo de interés y dos sondas lineales fluorogénicas, específicas de cada alelo. Estas sondas están marcadas en el extremo 5' con un fluorocromo de referencia, distinto para cada sonda, y una molécula extintora en el 3'. Cuando las sondas están intactas, la señal emitida por la excitación del fluorocromo de referencia es captada por la molécula extintora, debido a la proximidad física entre ambas, y por tanto no se detecta. La señal fluorescente, diferente para cada alelo, sí se detecta cuando la sonda hibrida con el alelo totalmente complementario y se libera el fluorocromo de referencia, por la actividad 5'→3' exonucleasa de la polimerasa, durante los ciclos de la reacción de PCR. APLICACIONES Los polimorfismos genéticos de un solo nucleótido (en inglés single nucleotide polimorphisms o SNPs) son la forma más frecuente de variación que se puede encontrar en el genoma humano. El estudio de la variabilidad genética tiene repercusión biosanitaria puesto que el papel que se atribuye a los SNPs es, junto con distintos factores ambientales, de moduladores de la susceptibilidad individual a padecer la mayoría de las enfermedades comunes (hipertensión, diabetes, obesidad, arteriosclerosis...). De este modo, el desarrollo de las técnicas de genotipado es un tema en auge actualmente y es el campo en el que se encuadra la invención. VENTAJA COMPETITIVA Las principales ventajas de la presente invención son: Gran rapidez que permite el genotipado a gran escala ya que la reacción de PCR y la detección de la señal fluorescente son simultáneas. Asignación de genotipos automatizada y obtenible de forma inmediata al finalizar la reacción. Gran sensibilidad que permite genotipar muestras empleando concentraciones muy bajas de ADN. Menor riesgo de contaminación al tratarse de un ensayo homogéneo.

Conjunto de Cebadores, Sondas, Procedimiento y Kit para la Detección y Diferenciación de Secuencias de ADN Específicas de Brucella spp y Mycobacterium tuberculosis complex

26 de octubre de 2010

La tuberculosis y la brucelosis son enfermedades que producen una alta morbilidad y continúan siendo un importante problema socio-sanitario en nuestro medio. La presente invención se refiere a un conjunto de cebadores, sondas, procedimiento y kit de diagnóstico molecular para diferenciar entre Brucella spp. y Mycobacterium tuberculosis complex; más concretamente para la detección de ADN específico de gérmenes del género Brucella y del genero Mycobacterium tuberculosis en muestras clínicas no sanguíneas, que está basada en la amplificación simultánea de ADN de ambos géneros mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Múltiple en Tiempo Real (M-RTPCR). La técnica desarrollada ha demostrado ser mucho más sensible que los métodos bacteriológicos, y más específica que los métodos serológicos habituales, permitiendo su utilización la puesta en práctica de un procedimiento fácil y rápido de diagnóstico molecular diferencial entre tuberculosis extrapulmonar y complicaciones focales producida por Brucella spp. en muestras clínicas de enfermos. APLICACIONES Sus aplicaciones van destinadas fundamentalmente a los sectores de la salud y la biomedicina, pudiéndose emplear en la mejora de los métodos de diagnóstico clínicos de índole bacteriológico, serológico y de tinción. VENTAJA COMPETITIVA Esta técnica es significativamente más sensible y específica que los métodos de diagnóstico clínico tradicionales (bacteriológicos, serológicos y de tinción) y presenta las siguientes ventajas: · La detección en un único tubo de los productos PCR es rápida, fácil y objetiva, permitiendo un fácil y rápido diagnóstico de la infección específica (brucelosis o tuberculosis); · No requiere utilizar electroforesis en geles de agarosa, luz ultravioleta, ni el uso de agentes tóxicos como el bromuro de etidio, para la detección de los productos obtenidos; · Debido a que la M-RT-PCR se realiza en un sistema cerrado que no requiere manipulación de los productos PCR una vez completada la misma, disminuye notablemente el riesgo de contaminación por arrastre; · Permite la monitorización de la respuesta al tratamiento y la detección precoz de las recidivas. · Evita el riesgo de manipulación de los microorganismos por el personal de laboratorio; · Permite el manejo simultáneo de un elevado número de muestras; · Es susceptible de ser automatizada, lo cual la hace muy atractiva para el uso en cualquier laboratorio clínico.

Procedimiento y catalizador para la oxidación selectiva de grupos aldehído

13 de enero de 2012

El agua es fuente de vida ya que es un excelente medio para preparar compuestos químicos. El agua mediante procesos catalíticos homogéneos permite obtener aquellos productos necesarios para la sociedad actual mediante procedimientos más económicos y rentables además de ser más respetuosos con el medio ambiente. Mediante la catálisis homogénea en agua usando catalizadores metálicos acuosolubles se recupera el metal que constituye el catalizador. Los productos obtenidos son más puros, no necesitan de purificaciones posteriores y de esa forma pueden ser empleados como fármacos sin que exista un posible peligro de contaminación con metales pesados. Entre los productos con posibles propiedades farmacológicas destacan los ácidos, que se pueden obtener por oxidación de los aldehídos, los cuales pueden obtenerse de fuentes naturales. Los procesos tradicionales de oxidación de aldehídos requieren oxidantes enérgicos y condiciones muy rigurosas que no suelen ser selectivas. No existe en la actualidad ningún ejemplo en donde se describa la oxidación selectiva del grupo aldehído en agua a temperaturas moderadas y menos aún en donde la luz visible juegue algún papel, o como activador del proceso o como fuente de energía. Un procedimiento que reúna estas características sería económico, simple y respetuoso con el medio ambiente ya que emplea agua, radiación visible y la contaminación con el metal es mínima, tal y como es el objeto de la patente presentada Ventaja competitiva La invención tiene por objeto un procedimiento general para oxidar selectivamente grupos aldehidos en moléculas orgánicas, usando como disolvente agua, como atmósfera de reacción aire o gases inertes, a presión atmosférica y a temperaturas cercanas a la ambiente. Como productos de la reacción se pueden obtener todos los derivados oxidados de un grupo aldehído tales como ácidos o superácidos tanto alquílicos como arílicos, conservando la integridad y posición del resto de grupos funcionales de la molécula. La oxidación selectiva viene propiciada por la presencia de complejos metálicos solubles en agua y usando agua como uno de los disolventes. De esta forma se consigue la síntesis de moléculas reactivas de alto valor añadido a partir de moléculas más económicas, en agua, a temperatura ambiente o cercana a la ambiente, a presión atmosférica y en presencia de aire. Por lo tanto es un método muy económico y ecológico, al requerir sólo muy poca energía, no dar lugar a productos contaminantes y utilizar agua como medio de reacción.

Procedimiento de extracción mediante disolución en el agua de productos solubles contenido en envoltura hidrosoluble

25 de enero de 2012

Dispositivo para la extracción mediante dilución en el agua de riego de envases hidrosolubles conteniendo al menos una sustancia nutritiva para cualquier tipo de planta ornamental, césped o cultivo. La invención se refiere a la adaptación y mejora de un dispositivo de filtrado de agua de uso doméstico para la extracción de un producto sólido (fertilizante) contenido en su interior mediante la disolución del mismo en el agua de riego. El fertilizante (producto sólido soluble) estará contenido en un envase hidrosoluble que impida el contacto con el producto durante la manipulación para introducirlo en el dispositivo. La sustancia fertilizante puede ser pulverulenta, cristalina, micro granulada, granulada o compactada de forma apropiada en uno o varios pedazos. El dispositivo incluye un sistema de filtrado colocado antes de la salida del agua con el producto disuelto que evitará obturaciones del sistema.